亚细胞定位的实验仪器_亚细胞定位观察_学习技巧_网圈部落

文章导读:

激光扫描共聚焦显微镜（Confocal laser scanning microscope，CLSM)是近代最先进的细胞生物医学分析仪器之一。目前，激光扫描共聚焦显微技术已用于细胞形态定位、立体结构重组、动态变化过程等研究，并提供定量荧光测定

YFP和GFP其实是序列基本相同的两种蛋白

GFP就是绿色荧光蛋白，YFP就是Thr203以Tyr取代，发出黄色的荧光，成为黄色荧光蛋白

因此两者最大的区别则是发射波长了

亚细胞定位用YFP或者GFP都是可以的

需要考虑：

如果是标记在N端很可能影响定位

如果是红色的探针，选用绿色GFP比较经典，两者叠合的橙色也是很多文献上常采用的。但如果是蓝色的探针，则选用黄色YFP比较容易区分一点

难道又推出新的荧光蛋白了？目前主要用作亚细胞定位的是GFP绿色萤光蛋白，就是因为这个今年3个哥们得了诺贝尔化学奖。

亚细胞定位就是看目的基因的表达产物被定为在细胞的哪个位置，比如细胞核或细胞质。

操作上一种方法是在你要表达的基因上加上高效启动子和一段GFP序列，用基因枪将你整合的序列打入一些植物组织，比如洋葱表皮，培养一小段时间。荣荧光显微镜观察，相应的亚细胞结构会呈现绿色。以此来判断你要研究的基因产物在细胞中位置。

用报告基因技术呀比如说最常用的绿色荧光蛋白GFP或者改造过的EGFP等。和目的基因构建成为融合蛋白，转入细胞中以后，用激光扫描共聚焦显微镜就可以观察到基因的亚细胞定位

亚细胞定位的实验仪器_亚细胞定位观察

亚细胞定位是指某种蛋白或表达产物在细胞内的具体存在部位。如仅在核内存在，还是胞质内存在，还是细胞膜上存在。

GFP实际是给你要研究的物质加上标记。使用GFP必须构建融合蛋白载体，并有效表达。这样在荧光显微镜下，如果看到细胞内某一部位存在GFP信号，则说明和GFP融合的蛋白也存在于该部位，这样就达到了确定某物质亚细胞定位的目的。