转化烟草亚细胞定位_烟草亚细胞定位图怎么看

文章导读:

• 1、亚细胞定位问题
• 2、为了更好研究HD1基因的亚细胞定位，我们构建了含有35s启动子：HD1-GFP的双元载体
• 3、如何判断烟草亚细胞定位是细胞壁

亚细胞定位问题

亚细胞定位是指某种蛋白或表达产物在细胞内的具体存在部位。如仅在核内存在，还是胞质内存在，还是细胞膜上存在。

gfp实际是给你要研究的物质加上标记。使用gfp必须构建融合蛋白载体，并有效表达。这样在荧光显微镜下，如果看到细胞内某一部位存在gfp信号，则说明和gfp融合的蛋白也存在于该部位，这样就达到了确定某物质亚细胞定位的目的。

为了更好研究HD1基因的亚细胞定位，我们构建了含有35s启动子：HD1-GFP的双元载体

这是动物还是植物细胞工程？看起来像植物，双元载体的话，质粒应该比较大，应该不是打基因枪或是原生质体了，一般是用农杆菌侵染烟草表皮瞬时转化吧。有很多protocol，我就提供一份我用过的吧：

1 载体转化入农杆菌；2 工程菌单克隆于YEB培养基 28℃，过夜培养；3. 1%扩大培养于新培养基（YEB+100uM AS+ 10mM Mes【pH5.7】）；4 收集农杆菌，用注射液（10mM MgCl2+10mMMes【pH5.7】）+20uM AS；）将农杆菌稀释至OD600=1左右，室温活化3h；5 用注射器注射烟草成熟叶片； 6 避光2-3天； 7 Confocal 观察

成败关键：1 农杆菌菌株毒力强一点好EHA105，GV3101比较好，LBA404不好；2 AS诱导；3 农杆菌需要一定时间活化； 4 所用烟草要健康，叶片要大而平整，方便注射

如何判断烟草亚细胞定位是细胞壁

如何判断烟草亚细胞定位是细胞壁

预测蛋白质的亚细胞定位，是通过生物信息学的方法的。

或者你在NCBI数据库中比对到了编码类似蛋白的基因，如果该基因有人做过亚细胞定位的实验，你也可以大概知道其编码的蛋白质在细胞内部的定位。

不同物种，不同基因家族成员有可能有区别。

糖酵解途径是体内葡萄糖代谢最主要的途径之一，也是糖、脂肪和氨基酸代谢相联系的途径。由糖酵解途径的中间产物可转变成甘油，以合成脂肪，反之由脂肪分解而来的甘油也可进入糖酵解途径氧化。丙酮酸可与丙氨酸相互转变。